用已知细菌或细菌抗原检测体液中有无相应抗体及抗体效价的动态观察,用于感染性疾病的辅助诊断。近年来开反应用的酶免疫(EIA)、免疫荧光(IF)及放射免疫(RIA)技术等实验室病原学诊断方法,具有微量、快速、灵敏、特异等优点,被认为是血清学检测特异性抗原抗体方法的一次***,目前在病毒诊断中已经替代间接血凝试验、反向被动血凝试验、补体结合试验及对流电泳等一些传统的血清学诊断方法,在细菌的病原学诊断应用中,也有此趋势。
(一)酶联免疫吸附试验(ELISA)、放射免疫试验(RIA)及免疫荧光试验(IF)
ELISA、RIA及IF均为用于检测感染者血清中特异性抗体或抗原的方法,均为应用标记的抗原检测血清中抗异性抗体,或应用标记的抗体检测血清中特异性抗原。例如,以ELISA或RIA法检测A族链球菌、淋病奈瑟氏菌及肺炎链球菌抗原,以IF法检测志贺氏菌、霍乱弧菌感染等,均已应用于临床诊断。
(二)蛋白印迹试验(western blot,WB)
蛋白印迹试验(WB)是在ELISA应用原理基础上发展的一项新技术,用于检测微生物的特异性蛋白抗原或患者相对应的蛋白抗体的实验室诊断方法。其原理和操作步骤是依据微生物蛋白抗原分子量的不同,可由SDS-PAGE电泳分开多个蛋白条带,经转移电泳装置转移到硝酸纤维素膜上,加入第一抗体(特异的抗血清)使之特异性地与其抗原决定簇结合,再加入酶标记或同位素标记的第二抗体,经与抗原抗体结合物作用后,最后加入酶底物或经胶片曝光,显示特异显色蛋白条带或曝光条带并判断结果。若用此试验检测患者血清特异性抗体,可用已知微生物蛋白抗原捕捉患者血清中特异性抗体,再结合酶标记抗人抗体并观察结果。蛋白印迹分析可作为ELISA检测结果的确证试验,在AIDS临床检测中最为常用。
蛋白印迹试验
(三)中和试验(NT)
中和试验(NT)为在检测病原微生物(病毒、细菌等)的血清学试验过程中,先在被检血清或其他液体标本中加入已知的特异性抗体或抗原,使其发生中和反应后,再检测被检血清中其特异性抗原或抗体。如被检特异性抗原或抗体为阴性,则中和试验判断为阳性,表示被检血清中存在特异性抗原或抗体。如抗链球菌溶血素O试验,用于风湿热辅助诊断。
(四)试管凝集试验
肥达氏试验是辅助诊断伤寒或副伤寒病常用的一种血清学试验,即用已知伤寒杆菌的菌体抗原(O抗原)、鞭毛抗原(H抗原)及甲型或乙型副伤寒杆菌的鞭毛抗原(PA或PB抗原),测定人血清中相应抗体效价,如抗体效价高或恢复期血清抗体效价是急性期的≥4倍,均有诊断意义。
试管凝集试验——血清稀释法